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脱氧雪腐镰刀菌烯醇特快速检测

简要描述:

酶联免疫分析快速定量测定脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素试剂盒德国R-Biopharm制造(中文翻译件仅供参考,以试剂盒内附的英文原件为准)。

更新时间:2017-08-06

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脱氧雪腐镰刀菌烯醇特快速检测

订货号: R5903
产品名称: 脱氧雪腐镰刀菌烯醇特快速检测 (5分钟)
产品英文名称: DON Express
包装: 32次检测
产品介绍:
产品说明: 脱氧雪腐镰刀菌烯醇特快速检测 (5分钟半定量分析

订货号: R5902
产品名称: 脱氧雪腐镰刀菌烯醇快速检测 (15分钟)
产品英文名称: FAST DON
包装: 48次检测
产品介绍:
产品说明: 脱氧雪腐镰刀菌烯醇快速检测 (15分钟) AOAC 认证方法

订货号: R5901
产品名称: 脱氧雪腐镰刀菌烯醇快速检测 (15分钟)
产品英文名称: FAST DON
包装: 96次检测
产品介绍:
产品说明: 脱氧雪腐镰刀菌烯醇快速检测 (15分钟) AOAC 认证方法

订货号: R5906
产品名称: 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (高灵敏度)
产品英文名称: DON
包装: 96次检测
产品介绍:
产品说明: 脱氧雪腐镰刀菌烯醇高灵敏度单克隆抗体

呕吐毒素高灵敏度检测试剂盒

RIDASCREEN® DON

酶联免疫分析快速定量测定脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素试剂盒德国R-Biopharm制造(中文翻译件仅供参考,以试剂盒内附的英文原件为准)。

RIDASCREEN® DON(产品编号:R5906)

1. 用途

   RIDASCREEN® DON采用竞争性的酶免疫分析法定量分析谷物、麦芽、啤酒及饲料中的呕吐毒素。试剂盒中含有酶免疫分析法所用的所有的试剂。试剂盒可以进行96个试验,包括标准。定量分析要求使用酶标板读数仪(含450nm波长)。

2. 概要

化学上称作脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol)的呕吐毒素(Vomitoxin)属于霉菌的单端孢菌素族,是由几种粉色镰刀霉真菌属产生的。玉米中zui容易产生这种毒素,通常在欧洲及北美发现的三种毒素是脱氧雪腐镰刀菌烯醇, 3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇,15脱氧雪腐镰刀菌烯醇。呕吐毒素在小麦、玉米以及稻米中的含量通常是mg/kg级的,由于他们高的细胞毒素及免疫抑制性质,对人类及动物构成了健康威胁。使用RIDASCREENâ DON 试剂盒可以检测谷物、玉米、大麦及饲料样品中的呕吐毒素,具有快速、准确的优点。

3.测定原理

测定的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有针对呕吐毒素小鼠IgG的捕捉抗体。加入呕吐毒素抗体,酶标记物,标准或样品溶液。游离呕吐毒素与酶标记物竞争呕吐毒素抗体,同时呕吐毒素抗体与捕捉抗体连接。没有连接的酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶基质(过氧化尿素)和发色剂(四甲基联苯胺)加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将红色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色产生变化。在450nm处测量,吸收光强度与样品中的浓度成反比。

4.  提供的试剂

每一个盒中的试剂足够进行91个测量(附加5个标准分析孔),盒中的材料如下:

1 X 96孔板(12X 8孔,可以拆分为单孔)包被有捕捉抗体

5 X 标准液, 1.3ml/瓶, 为呕吐毒素标准溶液

标准液浓度为:0ppb;3.7ppb;11.1ppb;33.3ppb;100ppb 

1 X 呕吐毒素抗体溶液(6ml)小鼠单克隆………………黑色帽

1 X 酶标记的呕吐毒素(6ml)……………………………红色帽

1 X 基质/发色剂(12ml)………………………………白色滴瓶

1 X 反应停止液1M硫酸(12ml)………………………黄色滴瓶

1 X 洗液:10mM的磷酸盐缓冲液(PH 7.4)含有0.05%的Tween20

5.  需要的材料但盒中不提供

5.1设备

----微孔板酶标仪(450nm)定量分析用

----振荡器

----粉碎机

----50ul, 100ul, 1000ul微量加样器

----100ml,1L量筒

----50ml 漏斗及容量瓶

----Whatman NO.1或相当的滤纸

5.2 试剂

----蒸馏水或去离子水

6. 操作者应该注意之事项

----标准液含有呕吐毒素,应特别小心

----使用过的玻璃容器及呕吐毒素溶液用pH 7的高氯酸溶液(10%V/V)浸泡过夜

----反应停止液为1M硫酸,避免接触皮肤

----不要使用过了有效日期的试剂盒, 稀释或搀杂使用会引起 灵敏度的降低

----不要交换使用不同批号的盒中试剂

7. 储存条件

----保存试剂盒于2-8℃。不要冷冻

----基质/发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下

----将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封

8. 试剂变质的迹象

红色的基质/发色剂变为蓝色,表明基质/发色剂变质,应当弃之。

0标准的吸光度值小于0.6个单位(A450nm<0.6)时,表示试剂可能变质。

9. 样品处理

样品应当在暗处及冷藏保存

9.1谷物、麦芽、饲料

----粉碎5g有代表性的样品与25ml蒸馏水混合

----强力振荡3分钟

----用Whatman No.1滤纸过滤

----取50ul稀释液进行分析

根据需要可以增加样品量,但溶液的量也应相应增加(例如:样品50g+1000ml蒸馏水)

9.2 啤酒

----取足够量的啤酒样品,除去过量的CO2

例如:搅拌啤酒样品,直至不产生明显的气泡。如果啤酒样品产生混浊,在除去过量的CO2之后,建议在样品检测之前,要进行无菌过滤。

9.3麦芽汁

----取50μl样品到每个微孔板底

如果样品产生混浊,建议在样品检测之前,要进行无菌过滤。

   

10. 酶标免疫分析程序

10.1测定之前注意事项

1. 使用之前将所有试剂回升至室温(20-25℃)。

2. 使用之后立即将所有试剂放回2-8 ℃。

3. 如果样品量大建议使用多通道移液器,在使用中不要让微孔干燥。

4. 在EIA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的*性,仔细按照推荐的洗板顺序操作是EIA测定程序中的要点。

5. 在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖子盖住微孔。

10.2包被有抗体的微孔板条

锡箔袋沿横向压皱外边打开。取出需用数量的微孔板及框架, 将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封, 保存于2-8℃。不要冷冻。

10.3标准液

呕吐毒素标准液为直接应用液。

10.4制备洗液缓冲液

方法一: 

试剂盒中装有磷酸盐小袋,每个小袋用1L蒸馏水溶解,溶解的洗液在4oC条件下可以保存4周。

方法二:

将磷酸盐每小袋只用100ml蒸馏水溶解,这样可以得到一个10倍的缓冲液浓缩液。这种溶液在室温(18-22°C)下,可保存8周。

使用时,1倍的浓缩液+9倍的蒸馏水稀释即可得到待用的洗涤缓冲液。

10.5测定程序(在18-24℃条件下操作)

1. 根据样品量将足够数量的孔条插入微孔架,记录样品及标准位置。

2. 加入50ul的标准或处理好的样品到各自的微孔中,每个标准和样品必须使用新的吸头。

3. 加入50ul酶标记物到微孔底部(红色盖)。(注意移液器管尖千万不要接触到放进孔中的液体,避免交叉污染。)

4. 加入50ul抗体溶液(黑色盖)到每一个微孔底部,充分混合,在室温(20-25°C)孵育30(+/-1)分钟。(注意此操作步骤要快,尽量保持前后孔孵育时间的*,如果实验所用孔数量多,请用多通道移液器。移液器管尖千万不要接触到放进孔中的液体)。

5. 倒出孔中的液体,将微孔架倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中的液体。用洗瓶或多通道移液器将250ul洗涤缓冲液加入孔中。再次倒出孔中的液体,完全除去孔中的液体,再重复操作洗涤步骤两次以上。(移液器管尖千万不要接触到放进孔中的液体,避免污染洗涤液造成洗板不彻底。洗板后要立即进行下一步操作,避免板孔干躁造成重复性差)。

6. 加入 2滴(或100ul)基质/发色试剂(白色滴瓶)到微孔中, 充分混合并在室温(20-25暗处孵育15(+/-0.5)分钟(注意此操作步骤要快,尽量保持前后孔孵育时间的*,使用多通道移液器加液,移液器管尖千万不要接触到放进孔中的液体)。

7. 加入 2滴(或100ul)反应停止液(黄色滴瓶)到微孔中混合好, (注意此操作步骤要快,如果实验所用孔数量多,请将所需数量的滴瓶中液体转移至V型试剂槽中,并用多通道移液器加液。)在450nm处测量吸光度值以空气为空白,必须在加入停止液后10分钟内读取光度值。

11. 结果

定量分析:所获得的标准和样品吸光度值除以*个标准(0标准)的吸光度值再乘以100.因此0标准等于100%并且以百分比给出吸光度值。

标准的吸光度值(或样品)

----------------------------------x 100=   %吸光度值

0标准的吸光度值

计算的标准值绘成为一个对应呕吐毒素浓度(µg/kg)的半对数坐标系统曲线图, 相对应每一个样品的浓度(µg/kg)可以从标准曲线上读出。

请注意:

为了获得样品的实际浓度,从曲线上读出的数据,要乘以相应的稀释系数

谷物、大麦、饲料………………………………5

啤酒………………………………………………1

麦芽汁……………………………………………1

12. 特异性

RIDASCREEN® DON试剂盒的特异性通过对相应的毒素进行交叉反应性分析而得到的。

交叉反应

                                        

13. 再现性

由三个不同的实验结果确定了室内精密度,图2显示出RIDASCREEN呕吐毒素试剂盒的精密度情况, 获得的标准吸收值的变异系数(%CV)对相应呕吐毒素浓度作曲线,可以看到在全部范围内变异系数如此之低,可以得到很好的再现性。

14. 检测下限

谷物、大麦、饲料………………………………18.5µg/kg

啤酒………………………………………………3.7µg/kg

麦芽汁……………………………………………3.7µg/kg

15. 参考文献(略)

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