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德国拜发甘油检测试剂盒

简要描述:

德国拜发甘油检测试剂盒
酶法分析试剂盒(紫外分光光度法)此法适用于检测食品(啤酒、葡萄汁、醋、蜂蜜、酒精、果酒)、化妆品、药品(溶液、栓剂)、纸板、烟草及生物制品中的甘油。
甘油在甘油激酶的催化下可被ATP磷酸化为3-磷酸甘油酯,ATP转化为ADP

更新时间:2019-01-05

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德国拜发甘油检测试剂盒

德国拜发甘油检测试剂盒

甘油检测试剂盒

(酶学试剂盒)

订货号:10148270035
产品名称:甘油(Glycerol )
产品英文名称:Glycerol
包装:Ca.3 x 11 tests
产品介绍:如下
产品说明:Glycerol (用于检测食品中的甘油)

 

酶法分析试剂盒(紫外分光光度法)

RIDASCREEN(产品编号:0 414 433)      30次检测

 

 

1. 简介

酶法分析试剂盒(紫外分光光度法)此法适用于检测食品(啤酒、葡萄汁、醋、蜂蜜、酒精、果酒)、化妆品、药品(溶液、栓剂)、纸板、烟草及生物制品中的甘油。

 

2.  原理

甘油在甘油激酶的催化下可被ATP磷酸化为3-磷酸甘油酯,ATP转化为ADP; 反应式

                GK

Glycerol﹢ATP           L-glycerol-3-phosphate﹢ADP

 

上式中形成的ADP在丙酮酸激酶的催化下可与PEP作用下生成ATP及丙酮酸酯; 反应式

           PK

ADP﹢PEP          ATP﹢Pyruvate

 

丙酮酸酯在L-乳酸酯脱氢酶的作用下可被NADH还原为L-乳酸酯,NADH被氧化为NAD; 反应式

                  L-LDH

Pyruvate﹢NADH﹢H       L-lactate﹢NAD

 

被氧化的NADH的量取决于甘油的量,NADH的吸光度值可在334,340及365nm下测量。

 

3.  试剂盒内容物

----瓶1共有3瓶,每瓶约有2g辅酶及缓冲液的混和物,包括:甘氨酰甘氨酸缓冲液, PH约7.4; NADH约7mg;ATP约22mg;PEP-CHA约11mg;硫酸镁

----瓶2约0.4ml悬浮物,包括:

丙酮酸激酶,约240U; L-乳酸酯脱氢酶,约220U

----瓶3约0.4ml甘油激酶悬浮物,约34U

----瓶4为甘油检测对照溶液(甘油检测对照溶液可不需要计算结果),此溶液使用时不需稀释。(效期见标签)

 

4.  检测溶液的制备 (10次)

----取出1瓶瓶1, 用11ml重蒸水溶解,使用时此溶液需在20-25℃持续回温约10分钟

----瓶 2不需稀释

----瓶 3不需稀释

 

5.  操作者应该注意之事项

使用前请仔细阅读,中文翻译件仅供参考

 

----瓶1约含500mg碳酸钠,应避免接触皮肤和呼吸器官,其他用于甘油检测的试剂不具有危险性

----实验之后,用过的试剂可作为实验室废料处理,但必须在当地法规允许的前提下

 

6.  储存条件

----瓶 1在2-8℃下保存(见标签),溶液1在2-8℃下可保存4天,溶液1使用前需回温至20-25℃

----瓶2及3在2-8℃下保存(见标签)

 

7.  样品处理

----直接取用无色,透明,中性的溶液或按稀释表格稀释后进行检测,体积为2.000ml

----过滤混浊溶液

----除去样品溶液中的二氧化碳气体

----加入氢氧化钠或氢氧化钾来调节酸溶液的PH值约为8

----对于深颜色的样品溶液可不需稀释或者用PVPP或酰胺配成较高浓度的溶液如:1g/100ml

----粉碎或均质固体和半固体样品,用水抽提或溶解,而后过滤,通过Carrez澄清液可脱去其中的混浊物或色素

----用Carrez试剂可脱去样品中的蛋白质

----用热水抽提样品中的脂肪(抽提温度需在脂肪的溶解度之上),冷却后可分离出脂肪,将余下物质转移至容量瓶中并加水至刻度,冰浴15分钟而后过滤,热水抽提后用Carrez溶液澄清

 

8.  过程

1.  波长:340nm,Hg365nm或Hg334nm

2.  比色杯:光径1.0cm

3.  温度:20-25℃

4.  zui终体积:3.020ml

5.  对照空气(光路上无比色杯)或对照水读取读数

6.  样品溶液:1-40ug甘油/检测(体积为0.100-2.000ml样品体积)

7. 具体操作见如下表格

 

 

 

 

 

移液

空白(ml

样品(ml)

溶液1

样品溶液

重蒸水

悬浮物2

1.000

-

2.000

0.010

1.000

0.100

1.900

0.010

混和,直至前反应完全反应后,约5-7分钟,读取吸光度值A1,而后加入下列物质:

悬浮物3

0.010

0.010

混和,等反应进行完全后(约5-10分钟),立即读取样品和空白的吸光度值A2

如果在15分钟后反应尚未停止,则在2分钟的间隔内继续读取读数,直至此值不再变化。

 

分别测样品与空白的吸光度值差,而后用样品吸光度值差减去空白吸光度值差可以得到如下公式

△A=(A1 ―A2Sample―(A1 ―A2blank

 

若想得到一个足够精确的结果,则测得的吸光度的单位至少为0.100单位。

 

如果吸光度值差△A在334及340nm下测得的值高于1.000或在365nm下测得的值高于0.500,如此则表明样品溶液中甘油的浓度较高。

需根据稀释表格进行样品的稀释

 

9.  计算

根据以下公式计算浓度

V×MW

C=-----------------------×△A(g/l)

ε×d×v×1000

 

V=zui终体积(ml)

V=样品体积(ml)

MW=被检测物质的摩尔质量

D=光径(cm)

ε=NADH的消光系数

340nm=6.3(1×mmol-1×cm-1

Hg365nm=3.4(1×mmol-1×cm-1

Hg334nm=6.18(1×mmol-1×cm-1

 

甘油含量计算遵循如下公式

3.020×92.1

C=----------------------------×△A

ε×1.00×0.100×1000

2.781

=----------------×△A(g甘油/l样品溶液)

ε

 

如果样品溶液是稀释使用的,在计算结果时需乘以稀释系数F。

当分析固体或半固体时,测量前需称一定重量配制样品溶液,其结果需按下式计算

C 甘油(g/l样品溶液)

C甘油 =--------------------------×100(g/100g)

W 甘油(在样品溶液中)

 

10. 检测操作说明

被检样品中甘油含量在1ug至40ug之间。

为了得到一个足够的吸光度值差,样品溶液的浓度稀释在0.04g/L至0.4g/L之间。

 

稀释表格

每升样品溶液中甘油估计量

 

用水稀释

 

稀释倍数

﹤0.4g

0.4-4g

4.0-40g

﹥40g

-

1﹢9

1﹢99

1﹢999

1

10

100

1000

如果测得的吸光度值△A较低,例如低于0.100,则样品溶液需重新配制,可由下列几种解决方法

1. 可多称出些样品或不要过分稀释。

2. 加入到比色杯中的溶液体积可增加至2.000ml,当然为了得到相同的zui终体积(样品和空白),加入的水的体积就要相应减少。所加入的新溶液的体积在计算时是要考虑进去的。

 

11. 技术信息

加入悬浮物2(PK/L-LDH)后等待前反应进行完全后是非常必要的。

 

12. 特性

此法特异性适于甘油的检测。

 

13. 灵敏度和检测限

1. zui小的吸光分辨率为0.005个吸光单位,相应的zui大样品体积为2.000ml,340nm下测量,则样品的甘油浓度为0.1mg/L;若样品体积为0.100ml,则样品的甘油浓度为2mg/L。

2. 340nm下,吸光度值差为0.020可导出检测限为0.4mg/L,相应的zui大体积为2.000ml。

 

14. 线性

从1ug甘油/检品(0.4mg甘油 /L样品溶液,样品溶液V=2.000ml)到40ug甘油/检品(0.4g甘油/L样品溶液,样品V=0.100ml)

 

15. 精确性

用同一样品溶液做平行测定时,其吸光度值差会有0.005至0.010的差异,样品体积为0.100ml,340nm下测量,相应的甘油浓度约为2-5mg/L;若样品是经过稀释的,则在计算结果时需乘以稀释倍数。

 

16. 干扰信息来源

ATP和PEP的缓慢水解同NADH的缓慢氧化均可导致缓慢的蠕变反应;空白和样品的吸光度值可不必逐一立即检测。

 

17. 检测过程中的干扰

1. 根据过程中所给定的时间甘油若能转化完全,则可断定没有干扰发生。

2. 反应结束后,可加入一些甘油重新检测(定性或定量):如果加入标准物质后,吸光度值会随之改变,则可断定没有干扰发生。

3. 操作过程中的错误和干扰可通过两个样品体积的平行实验测得(如0.100ml和0.200ml):测得的吸光度值差应与样品体积成比例关系。

当测定固体样品时,可称取不同质量(如1g和2g)于同一100ml容量瓶中,测得的吸光度值差及样品的质量应与样品的体积成比例关系。

4. 样品所含物质带来的可能干扰可通过加入内标来控制:除去样品、空白及标准的检测外,样品加检测对照溶液也要检测的,测得的吸光度值差可计算干扰。

5. 通过回收试验可测定可能的损失:分别测定加入标准与不加入标准的样品,在误差范围之内可定量测定附加物。

 

18.  Carrez试剂的澄清作用

----移取液体样品于盛有60ml重蒸水的100ml容量瓶中或称取足够重量的样品于100ml容量瓶中

----加入60ml重蒸水

----仔细加入5mlCarrez-Ⅰ-溶液(85mM,3.60gK4Fe(CN)6*3H2O/100ml)和5ml Carrez-Ⅱ-溶液(250mM,7.20gZNSO4*7H2O/100ml)

----用氢氧化钠调节溶液PH于7.5-8.5,加入每一溶液后需充分混和,加水至容量瓶刻度,混和并过滤

 

19.  应用举例

1.果汁中甘油的检测

----稀释样品其浓度约在0.4g/L以下(见稀释表格)

----过滤混浊果汁,取用透明或淡色溶液用于检测

 

当分析深色果汁时(如:草莓汁和红葡萄汁)需要先脱色

具体操作

----在10ml果汁中加入0.1g酰胺粉末或PVPP

----搅拌1分钟后过滤

----取透明溶液用于检测,该溶液可带有轻微颜色

 

2.酒中甘油的检测

----根据稀释表格将样品进行稀释

----实际上红酒不需脱色也可进行检测

 

3.啤酒中甘油的检测

----取5-10ml啤酒用玻璃棒搅拌约1分钟,除去其中的二氧化碳气体

----根据稀释表格稀释脱去二氧化碳气体后的样品

 

4.烟草制品中甘油的检测

----充分混合并绞碎样品

----精确称取1g样品于100ml容量瓶中

----加入约70mL水磁力搅拌约1小时20-25℃下,而后加水至刻度,混和并过滤

----移取25ml滤液于50ml容量瓶中

----加入5mlCarrez-Ⅰ-溶液,5ml Carrez-Ⅱ-溶液及10ml氢氧化钠溶液,在加入每一溶液后均需充人混和

----加水至刻度混和并过滤,取滤液用于检(0.100ml-0.500ml)

 

5.化妆品中甘油的检测

 

6.发酵产品及生物培养基中甘油的检测

----置样品(可先经过离心)于80℃水浴中15分钟以停止酶的反应

----离心并取上层溶液(可根据稀释表格稀释)用于检测

----另外可用高氯酸或Carrez溶液脱除蛋白质

 

琼脂培养基需先均质,而后按以上方法进行操作。

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