腹泻毒素检测

腹泻毒素检测试剂盒

Diarrhetic shellfish poison  DSP

竞争性酶标免疫分析定量测定腹泻性毒素试剂盒日本制造（中文翻译件仅供参考，以试剂盒内附的英文原件为准）。

Diarrhetic shellfish poison  DSP（产品编号：U1001）

1.  用途

    采用竞争酶免疫分析法定量分析腹泻性毒素（冈田酸），试剂盒中包括了所有检测用的试剂。该试剂盒有48个试验孔包括标准试验，20分钟完成实验。如果进行定量分析，必需有酶标板读数仪。

2.  概要

略

3. 测定原理

略 

4. 提供的试剂 

① 反应板（1*8孔*3条）………………………. 2包

② 酶标记物………………. 1瓶（附带空瓶② +⑥）

③ 底物（15ml/瓶）………………………………1瓶

④ 发色剂……………………1瓶（附带空瓶③+④）

⑤ 反应停止液……………………………………. 1瓶

⑥ 洗液…………………………………………… .2瓶

⑦ 标准Ⅰ（10ppb）………………………………1瓶

⑧ 标准Ⅱ（100ppb）………………………………1瓶

⑨ 一次性微量移液管…………………..…………26个

5. 需要的材料但盒中不提供

5.1设备

----微孔板酶标仪（450nm）定量分析用

----离心机

----均质器

----磁搅拌器

5.2试剂

----甲醇

6.  操作者应该注意之事项

----标准液含有腹泻性毒素，应特别小心，避免接触

----反应停止液为1M硫酸，避免接触皮肤

----不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起    灵敏度的降低

----不要交换使用不同批号的盒中试剂

7.  储存条件

----保存试剂盒于2-80C。不要冷冻。

----无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下

----将不用的微孔板迅速放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂    一起重新密封

8. 样品处理

样品应当在暗处及冷藏保存

----把1-10克贝壳或中肠放进均质器

----加5倍90%的甲醇，总容积为样品所需使用的数量

----均质1-2分钟

----用滤纸过滤或离心后取上清液

----用双蒸水2倍稀释滤液。1份滤液+1份蒸馏水，混合均匀

9. 酶标免疫分析程序

9.1准备试剂

所有试剂使用前必须回至室温（22-250C），将盒子打开，室温放置至少1.5小时。以下实验在22-250C的实验桌面上进行。

1. 准确加入5ml 45%的甲醇到标准瓶⑦和瓶⑧中（到瓶子的指示线），盖上瓶盖用手剧烈振荡，这时⑦的浓度是10 ppb，⑧的浓度是100ppb。

2. 加50ul酶标记物（瓶②）和5ml洗液（瓶⑥）到空瓶②+⑥中混合，（②：⑥=1：100）。由于稀释后的酶标记物不稳定，要根据一次消耗的微孔数量稀释相应数量的酶标记物。例如25ul酶标记物+2.5ml洗液足够24个微孔用。

3. 加50ul发色剂（瓶④）和5ml底物（瓶③）到空瓶③+④中混合（④：③ =1：100）在暗处蔽光保存。由于稀释后的发色剂不稳定，要根据一次消耗的微孔数量稀释相应数量的发色剂。例如25ul发色剂+2.5ml底物足够24个微孔用。

注意：以上各步混合的液体要同时用完。

9.2检测步骤

为了清洗瓶嘴，在使用前挤掉几滴液体弃之，（②+⑥，③ +④，⑤，⑥）。

1.  抗原抗体反应

用一次性的微量移液管，分别向相应的微孔中加入50ul标准（10ppb、100ppb）和样品。

迅速向每个微孔中加入一滴（50ul）混合的酶标记物（瓶②+⑥），在桌上迅速来回的运动充分混合，室温下放置10分钟，（使用后用双蒸水清洗瓶子②+⑥三次）。

2.  洗板

甩出孔中的液体，用洗液滴瓶加5滴洗液洗涤板孔（250ul），倒转微孔板，在滤纸上拍打，除去残余的液体，重复四次。

3.  显色反应

加入一滴（50ul）混合的发色剂（瓶③+④）到每个微孔中，室温暗处放置6分钟（使用后用双蒸水清洗瓶子③+④三次）。

4.  停止反应

加入一滴（50ul）反应停止液（⑤）到每个微孔中，在桌子上上迅速来回的移动，混匀液体。

5.  判断

停止反应3分钟后，目测比较样品和标准（10ppb、100ppb）的颜色（颜色浅的浓度高）。当原始样品按这种方法提取，原始样品五倍提取液，滤液双倍稀释时，样品浓度为10ppb，原始样品浓度为100ppb，样品浓度为100ppb时，原始样品为1ppm。

定量分析

计算的标准值绘成为一个对应腹泻性毒素浓度（ng/kg）的半对数坐标系统曲线图， 相对应每一个样品的浓度（ng/kg）可以从标准曲线上读出。

例如

A      B      C     D     E     F    G    H  

10ppb 100ppb  ⑴    ⑵    ⑶    ⑷   ⑸    ⑹

检测下限和检测范围

检测下限：10ppb检测范围：10-100 ppb

（原始样品ppb）=（标准曲线读数）*（提取液体积（ml））*2/样品质量（g）

请注意

OA是一种有毒的混合物，要特别小心接触，橡胶手套玻璃制品实验后扔掉，包括可处理的移液管和反应板，所有物质必须做去毒处理，用5%的次氯酸浸泡至少1小时。

10. 完成实验的关键注意点

1. 按要求将所有试剂回升至室温22-250C，测量实验台面的温度为22-250C。

2. 将锡箔袋回至室温后，沿横向边压封线外侧剪开，取出需用数量的微孔板及框架， 将不用的微孔板立即放回原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2-80C。不要冷冻。

3. 如果用移液器洗微孔板时，移液器管尖千万不要进入微孔板孔中，不要接触到放进孔中的液体，避免污染洗涤液造成洗板不彻底。

4. 实验完毕后，如果容器再次使用，请认真洗净容器，不要造成容器的交叉污染，特别是不要将盛装过标准溶液的容器与其它容器同时洗涤（丢弃）。

5. 所有吸头应该一次性使用，要使用高品质的吸头。